猪链球菌抗体检测试剂盒（酶联免疫法）

使用说明书

产品名称

通用名：猪链球菌抗体检测试剂盒（酶联免疫法）

英文名：Streptococcus Suis Antibody Detection Kit (ELISA)

包装规格

96T×1/盒

检测原理

    本试剂盒由预包被猪链球菌提取蛋白的酶标板、酶标记物及其他配套试剂组成，应用酶联免疫法（ELISA）原理检测猪血清、血浆样本中猪链球菌抗体。实验时在酶标板中加入对照血清和待检样本，经温育后若样品中含有猪链球菌抗体，则将与酶标板上抗原结合，经洗涤除去未结合的其他成分后；再加入酶标记物，与酶标板上抗原抗体复合物发生特异性结合；再经洗涤除去未结合的酶标记物，在孔中加TMB底物液，与酶标结合物反应形成蓝色产物，显色深浅与样品中的特异性抗体含量成正相关；加入终止液终止反应后，产物变为黄色；用酶标仪在450nm波长测定各反应孔中的吸光值，即可知样品是否含有猪链球菌抗体。

试剂盒组成

2～8℃保存，有效期12个月。

包被板开封后请于2～8℃避光保存，避免受潮。使用期限为2个月。

适用仪器

含450nm波长的酶标仪，37℃恒温设备，可调微量移液器。

样品准备

1.取动物全血按常规方法制备血清，要求血清清亮，无溶血、无污染。样品1周内可于2～8℃保存，长期需置-20℃保存。

2.根据样本数量准备对应数量的小刻度EP管或血清稀释盘，用样品稀释液将待检血清按50倍稀释（如4μl血清加入196μl样品稀释液中，混匀）阴性、阳性对照不用稀释。

3.浓缩洗涤液使用前应恢复至室温使沉淀溶解，然后用蒸馏水或去离子水作20倍稀释成工作洗涤液(如19份蒸馏水或去离子水加1份浓缩洗涤液)。

检验方法

1.使用前将试剂盒置室温30分钟，恢复至室温。

2.取所需用量酶标板条，设阴性、阳性对照各1孔，未用的板条尽快密封，2～8℃保存。

3.阴性、阳性对照孔分别加入阴性、阳性对照100μl；样品孔每孔加入稀释后的样品100μl。

4.混匀，盖好盖板膜，置37℃温箱孵育30分钟。

5.甩去孔内液体，每孔加250ul工作洗涤液，用震荡混匀的方式洗涤60秒后弃去，重复洗涤5次，每次洗涤后需拍干液体。

6.每孔加酶标记物100μl，置37℃避光反应30分钟。

7.甩去孔内液体，每孔加250ul工作洗涤液，用震荡混匀的方式洗涤60秒后弃去，重复洗涤5次，每次洗涤后需拍干液体。

8.根据样本数量将显色液A与显色液B按等体积比例混匀配置为底物工作液，现配现用。每孔加100ul，置37℃避光反应10分钟。

9.每孔加终止液100μl，混匀，于450nm 测定各孔吸光值（OD值）

参考值

实验正常的情况下，阳性对照OD-阴性对照OD＞0.2。

检验结果的解释

1. S/P＝(样本OD-阴性对照OD)/(阳性对照OD-阴性对照OD)。

2. S/P≥0.4时结果判读为阳性。

3. 0.2＜S/P＜0.4时结果为疑似阳性；若接种过对应疫苗，则提示抗体水平不足，建议补打疫苗。

4. S/P＜0.2时结果判读为阴性。

试验方法的局限性

1. 本试剂盒仅作为定性检测猪血清、血浆中链球菌抗体的粗略评估。

2. 本试剂盒仅供研究使用，不得用于临床实验或人体实验。

注意事项

1.实验操作时需戴手套、穿工作衣，严格健全和执行消毒隔离制度，各种实验废弃物都应按传染物处理。

2.终止液具有腐蚀性，应避免接触皮肤和衣物，如不慎接触请立即用大量自来水冲洗。

3.酶标板从冷藏环境中取出时应恢复至室温方可开袋，未用完的酶标板需放入有干燥剂的密封袋中保存。

4.浓缩洗涤液在低温时容易结晶，使用时需恢复至室温以*溶解。

5.洗涤时各孔均需加满液体，防止孔口有游离酶不能洗净。

6.用于检测的样品应保持新鲜。

7.试验结果的判定必须以酶标仪读数为准。

8.不同批号试剂组分不得混用。