猪圆环病毒（2型）抗体检测试剂盒

需自备的设备及试剂

微量移液器： 0.5μl～10μl、10μl～100μl、100μl～1000μl。 一次性移液器吸头。 量筒：500ml。 96孔板酶标仪。 蒸馏水或去离子水。 洗瓶或洗板机。

样品制备

取动物全血，按常规方法制备血清，要求血清清亮，无溶血。

洗涤液的准备

浓缩洗涤液使用前应恢复至室温，如有盐结晶，摇动使结晶的盐溶解，然后用蒸馏水或去离子水作10倍稀释。稀释好的洗涤液可在4℃存放一周左右猪圆环病毒（2型）抗体检测试剂盒

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样品的稀释

在血清稀释板中按1：101的体积比稀释待检血清（例如：200μl样品稀释液中加2μl待检血清）。

注意：阴性和阳性对照不用稀释。取每个样品后都要更换吸头，准确记录每个样品在板上的位置。每个样品在加入到包被板微孔前应充分混匀。

操作步骤

猪圆环病毒（2型）抗体检测试剂盒取预包被的检测板（根据样品*，可拆开分次使用），将稀释好的待检血清取100μl加入到检测板孔中。同时设阴性、阳性及空白对照各1孔，取阴性及阳性对照各100μl

分别加入反应孔中，空白对照仅加入100μl样本稀释液。轻轻振匀孔中样品（勿溢出）。

盖上封板膜，置37℃温育30分钟。 小心揭开封板膜，甩掉板孔中的溶液，用洗涤液洗3次。每次用洗涤液注满板孔（约350μl），静置1分钟后甩掉。洗涤3次后在干净吸水纸上拍干。 每孔加酶结合物100μl，盖上封板膜，置37℃温育30分钟。 小心揭开封板膜，甩掉板孔中的溶液，洗涤3次, 方法同2。切记*在干净吸水纸上拍干。 每孔先加底物A液50μl、再加底物B液50μl，混匀、盖上封板膜37℃闭光显色10分钟。 每孔加终止液50μl，使反应终止，10分钟内测定结果。

结果判定

以空白对照调零用酶标仪于450nm（630nm作参比波长）读取吸光度A值。试验成立的条件是阳性对照孔A450值大于或等于0.4，阴性对照孔A450值必须小于0.1。如果试验无效，试验中的操作值得怀疑，试验应重做，并仔细检察各组分。

样品A450值大于0.25+阴性对照孔均值，判为阳性；样品A450值小于0.25+阴性对照孔均值，判为阴性；如阴性对照孔均值小于0.05按0.05计算。

有效期

贮存方法： 2 - 8oC下贮存。

有效期： 12个月。