猪流感病毒H1N2亚型检测试剂盒

猪流感病毒(Swine Influenza Virus, SIV)是猪呼吸道疾病的主要病原之一,目前已发现的猪流感病毒有H1N1、H1N2、H1N7、H2N3、H3N1、H3N2、H3N6、H4N6、H5N1及H9N2亚型。我国从2004年分离到第1株H1N2猪流感病毒以来,连续又在不同省份分离到H1N2亚型重配猪流感病毒,这类病毒能否引起区域性的或者全国性的猪流感暴发,值得更深一步研究。 本研究根据H1N2毒株的参考序列设计RT-PCR及测序引物,对本实验室分离猪流感病毒H1N2亚型检测试剂盒、鉴定的的两株H1N2亚型猪流感病毒(SW/HeB/10/06和SW/TJ/1/07)进行了全基因组序列测定,并利用生物信息学软件对其8个基因片段进行进化分析。结果SW/HeB/10/06和SW/TJ/1/07两个分离毒株的亲缘关系较远,8个基因片段的同源性:PB2为81.4%,PB1为83.2%,PA为83.0%,HA为90.1%,NP为81.6%,NA为91.7%,M为84.1%,NS为80.4%。毒株SW/TJ/1/07的HA及NA基因与我国的第1株H1N2分离株(SW/ZJ/1/04)同源性*,其6个内部基因分别与欧洲分离的两株H1N1亚型猪流感病毒具有*的同源性;毒株SW/HeB/10/06的HA、NA及NS基因片段与禽流.感病毒A/Turkey/MO/24093/99(H1N2)同源性*;其它5个内部基因分别与H1N1人流感病毒和H3N2及H1N2猪流感病毒的相应基因片段具有*同源性,SW/HeB/10/06为我国分离到的第1株人-禽-猪流感基因三重配病毒。以上结果表明我国所出现的H1N2毒株遗传背景较为复杂。 通过血凝抑制(HI)交互试验,从实验室分离的4株H1亚型猪流感病毒中筛选出一株具有抗原代表性的毒株SW/HeN/11/05 (H1N1)作为免疫原,制备抗H1亚型猪流感病毒的血凝素蛋白的单*抗体。将SW/HeN/11/05毒株接种9～11日龄鸡胚进行增殖,收取尿囊液,浓缩、纯化,与佐剂混匀,免疫6周龄BALB/c雌性小鼠,取免疫后小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0融合。采用HI和酶联免疫吸附试验(ELISA)方法筛选阳性细胞*,经连续多次*培养后获得2株能稳定分泌抗H1亚型HA蛋白特异性单*抗体的细胞株4E6B2和3E11C4。两株单*抗体能够与H1亚型猪流感病毒毒株发生特异性的反应,而与H3、H5、H9亚型猪流感病毒及其它常见猪病病原无交叉反应。 总之,本研究分析了两株H1N2亚型猪流感病毒的遗传进化关系,为两株亲缘关系较远的重配猪流感病毒,这两个H1N2亚型毒株的分离为猪作为混合器产生新型重配流感病毒提供了更进一步的证据;同时,制备了两株抗H1亚型猪流感病毒HA蛋白的单*抗体细胞株,为下一步建立H1亚型猪流感病毒诊断方法提供了物质基础和条件。