布鲁氏菌病(简称布病)严重危害畜牧养殖业安全和人类健康,而有效的检测方法能够为布病的预防、检测和净化提供技术支持。
布病检测方法很多,包括胶体金试纸条检测、酶联免疫检测方法、布病虎红平板凝集试验、试管凝集试验、全乳环状实验等,在众多检测方法中,胶体金试纸条检测法最为简单方便,其检测准确性如何?
布病抗体检测卡检测结果准确性如何?一起来关注——
布鲁氏菌病抗体检测方法有那些?
01免疫胶体金检测技术(GICA)
免疫胶体金检测技术是基于抗原抗体检测的一种新型免疫标记技术,在生物医学的各领域得到了日益广泛的应用。
胶体金法将布鲁氏菌抗原固定在NC滤膜上,当待测样本存在布鲁氏菌病抗体时,血清抗体将会有固定在NC膜上的抗原结合形成复合物,在胶体金颗粒的加持下,会显色出红色条带,进而判定样本中是否存在抗体。GICA 具有高灵敏度、血清用量更少、适于现场操作、检测样品广泛(部分GICA 产品检测范围可以涵盖血清、全血、奶样等不同样品)等优势。
02酶联免疫吸附试验(ELISA)
用于布病检测的 ELISA 有两种:
①间接 ELISA(i ELISA)
②竞 争 ELISA(c ELISA)
i ELISA是待检血清样本中的布鲁氏菌抗体与 ELISA 板上固定的布鲁氏菌抗原物质结合,利用酶标抗体检测,然后通过底物显色,最后用酶标仪来读值。i ELISA 灵敏度较高,标记的抗体较少,成本更低,但是试验周期更长。c ELISA 步骤较复杂,但可以检测含有布鲁氏菌抗体的不纯净血清,数据再现性更高,但是整体敏感性和特异性稍低。
ELISA 检测布病的敏感性较高,用酶标仪判定试验结果,避免了肉眼观察判定结果的误差,但对专业仪器要求较高,检测试剂比较昂贵,增加了检测成本,此外检测过程中对环境温度的要求也较高,因而限制了ELISA 的使用。
虎红平板凝集试验是一种经典的血清凝集试验,灵敏度高、价格便宜、操作方便。但受试验温度和凝集时间相对较短的影响,不易准确判定 结果,而且受操作人员的主观判断影响比较大,故常作为筛选试验,适用于具有专业知识背景的试验人员用于高危动物筛查及流行病学的研究。
04试管凝集试验(SAT)
试管凝集试验是一种检测血清中布鲁氏菌抗体的方法。布鲁氏菌抗原能够与血清中的IgM抗体反应产生凝集现象,通过肉眼观察试管中的凝集现象可做出结果判定。试管凝集试验特异性较强,不易受其他干扰因子影响,阳性结果比较准确。
但试管凝集试验也存在一定的不足,如每个血清样本需要4支试管来实现4个梯度的试验,在进行大批量样本检测时,需要大量的试管,试验过程中还需要24h的孵育时间,不仅对耗材的需求量较大,且试验时间也较长。
05全乳环状试验(MRT)
全乳环状试验主要通过检测牛奶样本中的抗体来实现布病检测,且一般仅用于奶牛的布病检测,不适用于其他品种家畜。如果待检牛奶样本中存在布鲁氏菌抗体,就会与试验用的红色布鲁氏菌抗原形成复合物,这些复合物会形成紫红色的乳脂环,从而实现布病检测。相比较于其他需要血清的检测方法;
全乳环状试验具有一定的优势,无论是单一奶牛的牛奶还是混合的大缸奶,都能实现布病检测,无需采血,不会使奶牛因驱赶、保定、采血等行为产生应激反应,使奶牛产量不受影响,养殖户更容易接受。
全乳环状试验的敏感性能够满足大型牛场布病的现场筛查,特异性较强,操作快捷而简便,试剂成本不高,试验结果可靠准确,全乳环状试验是一种能够代替试管凝集试验(SAT)的布病检测方法。但是,如果牛奶样本存放时间较长,或试验温度较高导致牛奶样本腐败,检测结果就可能出现假阳性。当牛奶样本中存在的初乳较多或者混合样本量较大时,也有可能出现一定的假阳性结果。
布鲁氏菌病作为人畜共患病,检测的方法包括抗原检测法和血清/全血抗体检测法两大类型。其中病原检测需要在专业的P3实验室或者专业的仪器配备相应人才检测等条件限制了此种检测方法的应用范围,才导致了布鲁氏菌病血清检测法成为布鲁氏菌病诊断的采用方法。
布病血清/全血抗体检测的方法很多,胶体金法由于其操作便捷性和较高性价比,势必逐步取代传统虎红平板法被用作现场布鲁氏菌病的快速筛查的检测产品。