实验步骤

1) 从不同生产厂商得到 100ml 的批次的试验血清。

 

2) 用本实验室常用的 2~3 种细胞来检测血清。

 

3) 将 lml 含有 20% 的上述待检血清的培养液加于 9 个培养皿中（35-mm), 每种批次的血清用 9 碟细胞培养皿进行检测。

 

4)9 碟中每 3 碟接种入 500、1000、2000 个细胞。如果细胞存活率较高，细胞数可降低。细胞不必长满，但应长到形成足够密度的单个克隆。细胞应在不含血清的培养液屮稀释，以免残留血淸遗留在现有的培养液中。细胞应加至体积为 1 ml 以便血清终浓度为 10%。现用的血清作为该方案的内标。

 

5) 配制 80 ml 含待检血清浓度为 10% 的培养液。用该培养液每周给细胞换液两次，共两周。克隆在此期间应较明显。

 

6) 进行克隆染色，比较不同批次血清的克隆数。克隆的染色用 1xPBS 漂洗，沥干 PBS 后，加人 2 ml 的 Wright 染液（Fisher Scientific)，室湿染色 8 分钟后，加人 2 ml 水, 室温放置 10 分钟后用水漂洗，观察克隆的数量和大小。